Ожирение и избыточный вес являются насущной проблемой современного общества. Так, в экономически развитых странах избыточным весом страдает 24% населения, тогда как в России – 17% взрослых [1]. В результате, растет распространённость сердечно-сосудистых заболеваний, гипертонии, болезней суставов и других вторичных признаков старения, следствием чего становится рост смертности и снижения качества жизни, особенно у пожилых людей. Одним из главных способов изменения обычной западной модели питания является применение различных диет.
Ограничение калорийности пищи (ОК), под которым обычно подразумевают продолжительное и существенное уменьшение потребления калорий с привычного уровня без недостаточности питания, давно считается наиболее эффективным немедикаментозным вмешательством, которое увеличивает продолжительность и качество жизни многих животных [2]. Постоянно накапливаются данные, свидетельствующие о положительных преимуществах ОК у людей, причем многие клинические испытания показали снижение веса и улучшение физиологических маркеров после как коротких, так и продолжительных периодов ОК. Тем не менее, традиционное непрерывное ежедневное ОК имеет плохой долгосрочный показатель успеха из-за недостаточно тщательного соблюдения указаний лечащего врача, а также из-за большого количества высококалорийных продуктов питания и напитков в рационе представителей современных обществ, мешающих человеку выдерживать традиционное ОК. Соответственно, учитывая текущую скорость старения населения, требуются инновационные методы для оптимизации сохранения здоровья населения [3].
В последнее время приобрели известность новые диетические стратегии, как перспективные альтернативы традиционному ОК. Интересно, что эти подходы могут стимулировать позитивные адаптационные процессы без ограничения энергии и потери веса, что ставит под сомнение догматическую точку зрения, что ОК является необходимым условием диеты, способствующей долголетию. Принимая во внимание обнадеживающие результаты исследований на животных, тестирование эффективности этих новых диетических стратегий на людях стало современной областью исследований для ученых в области геронтологии. На сегодняшний день наиболее признанным из этих подходов является интервальное (периодическое или краткосрочное) голодание (ИГ), режим питания, который регулирует время приема пищи или частоту приема пищи, чтобы обеспечить периодические эпизоды голодания или чрезмерного ограничения энергии, как правило, в течение 12 часов или дольше. Под этим общим термином были разработаны подходы для повышения физиологической функции и замедления старения и болезненных процессов через длительные периоды ежедневного ограничения поступающей энергии. Другие популярные стратегии манипулируют потреблением макронутриентов, чтобы стимулировать улучшение здоровья. Из них – наибольшее внимание уделяется ограничению белка, при этом исследователи утверждают, что снижение потребления белка является ключом к замедлению старения млекопитающих. Известный ученый д-р Марк Маттсон (Mark P. Mattson) [4] возглавил исследование потенциала ОК-стимулированного долголетия. Работы под руководством Маттсона постоянно совершенствуют методики и дают новаторское представление о влиянии новых диетических стратегий на продолжительность и качество жизни, что демонстрируется на животных моделях и на людях [5-7].
Здесь мы постараемся выяснить, дает ли существующая доказательная база, относящаяся к этим схемам, какое-либо превосходство по сравнению с традиционным ОК у людей, и, для начала, кратко классифицируем известные подходы [3]
1. Ограничение калорий. Преимущества, которые дает ОК у людей, хорошо известны. В популяциях, которые добровольно или невольно подвергаются ОК, наблюдается значительное улучшение физиологического функционирования.
2. Интервальное голодание. Диетической стратегией, которая использовалась в качестве альтернативы традиционному ОК, является ИГ. Предложены различные формы ИГ, но обычно они включают в себя серьезное или полное ограничение потребления энергии в течение 12 или более часов. ИГ, в свою очередь, подразделяется на отдельные модификации.
2.1 Голодание через день (или ИГ 1:1) – режим питания, который чередует дни потребления пищи ad libitum, т.е., неограниченно по своему желанию, со днями, которые фактически запрещают потребление калорий.
2.2 Измененное голодание через день. Учитывая возможные трудности с соблюдением рекомендаций во время исследований ИГ, некоторые исследовали предложили внести изменения, которые позволяют потреблять некоторые калории в периоды голодания. Здесь, в чередующиеся дни, еду строго ограничивают в один день, обычно до ≤ 25% от обычной потребности в энергии, и затем разрешается день употребления пищи ad libitum.
2.3 Голодание через день 5:2. Один из новых диетических подходов, которым уделяется наибольшее внимание, позволяет употреблять ad libitum 5 дней в неделю и строгое ограничение энергии или полный голодание в другие 2 дня. Дни голодания могут проводиться как в последовательные, так и в непоследовательные дни; таким образом, ИГ 5:2 позволяет пациентам, сидящим на диете, использовать более гибкие схемы, что делает его привлекательным для многих людей с непоследовательной работой или социальными обязательствами.
2.4 Ограниченное по времени питание (ОВП). Еще один подход, получивший известность в последнее время. Эта стратегия приема пищи ограничивает потребление временным окном, которое обычно длится менее 12 часов в день во время фазы бодрствования.
3. Ограничение белка. В настоящее время появляется все больше доказательств того, что ограничение белка и, в частности, незаменимых аминокислот, может быть преобладающим диетическим «посредником» для увеличения продолжительности жизни.
На сколько же эффективны предлагаемые схемы? На этот вопрос помогут ответить результаты клинических испытаний.
Предварительные эксперименты на животных показали обнадеживающие результаты. Впервые об успешном исследовании сообщили в 1944 году, когда было выявлено, что недоедающие мыши, склонные к лейкемии, снизившие при ОК средний вес на ~25% по сравнению с контролем, ингибировали развитие спонтанного лейкоза, который был причиной гибели у 10% голодавших мышей против 65% в контроле [8]. Мыши с ОК имели большую продолжительность жизни – до 27 месяцев против 18 в контрольной группе.
Значительное исследование по связи между ограничением пищи и опухолевыми заболеваниям проведено в 1983 году. Было обнаружено, что, когда самок B10C3F мышей ограничивали в пище, начиная с 24-дневного или 61-недельного возраста, у них было поразительно меньше опухолей, чем у животных, которых кормили ad libitum [9].
Так, на грызунах, самых широко используемых короткоживущих лабораторных животных, было показано, что при наиболее распространенном уровне (на 40% меньше, чем среднее неограниченное потребление пищи, и даже умеренном ОК (~20%), ОК продлевает жизнь за пределы контрольных групп, которых кормили ad libitum [2, 10]. Близкие результаты на грызунах получены во многих работах (см. обзоры [10, 11]).
На более сложноорганизованных животных – приматах – результаты оказались не столь однозначными. В исследовании ОК на серых мышиных лемурах (Microcebus murinus, распространенная модель старения человека) показано, что недоедание увеличивает продолжительность жизни, но влияет на целостность мозга животных [12]. Лемуры получали хроническое умеренное ОК (30%) по сравнению с контрольными животными. Через 4 года ОК увеличивало продолжительность жизни на ~50% (средняя выживаемость от 6,4 до 9,6 лет), уменьшало связанные со старением заболевания и снижало потерю белого вещества мозга в некоторых областях мозга. При этом, ускорялась потеря серого вещества на большей части головного мозга. Однако когнитивные и поведенческие характеристики не были модулированы ограничением калорий. Таким образом, хроническое ограничение калорийности может увеличить продолжительность жизни и улучшить здоровье приматов, но это влияет на целостность серого вещества мозга, не влияя на когнитивные функции [12].
В 2010 году был разработан уникальный протокол CALERIE (Comprehensive Assessment of the Long-term Effects of Reducing Intake of Energy – Комплексная оценка долгосрочных последствий снижения потребления энергии, NCT00427193), и в статье [13] были представлены дизайн и реализация первого систематического клинического исследования фазы 2 ОК у людей без ожирения, а сам протокол стал основой для многих последующих работ. Он оценивает широкий спектр физиологических эффектов ОК в нескольких областях, связанных с первичным и вторичным старением. В его основу легли предыдущие эксперименты на животных. Ученые предположили, что 2 года длительного ОК с 25% -ным сокращением потребления энергии приводят к положительным эффектам, сходным с наблюдаемыми в исследованиях на животных. В многоцентровом рандомизированном контролируемом исследование с параллельными группами задействовали 218 участников (22,0 ≤ индекс массы тела [ИМТ] <28,0 кг/м2), которых распределили в отношении ОК:контроль = 2:1. Контрольная группа получала питание ad libitum. В качестве первичными критериев были выбраны скорость метаболизма в покое и внутренняя температура, которые оценивали на исходном уровне и с интервалами в 6 месяцев. Вторичные исходы касаются образования оксирадикалов, маркеров сердечно-сосудистого риска, секреции и чувствительности к инсулину, иммунной и нейроэндокринной функции, качества жизни и когнитивных функций.
По завершению эксперимента (NCT00427193) были опубликованы результаты [14]. 82% из группы с ОК и 95% контрольной группы завершили протокол. Индекс массы тела в среднем составил 25,1 (диапазон: 21,9–28,0 кг/м2). Группа ОК достигла 11,7 % снижения потребления калорий (~50% от целевого) и сохранила потерю веса на 10,4%. Изменение веса в контроле было незначительным. Скорость метаболизма в покое значительно снизилась при ОК, через 12 месяцев, но не через 24 месяца. Изменение внутренней температуры мало отличалось между группами. Трийодтиронин в плазме снижается больше при ОК за 12 и 24 месяца, в то время как фактор некроза опухоли-α значительно снижается только через 24 месяца. У группы ОК было более значительное снижение кардиометаболических факторов риска и ежедневных энергетических затрат, скорректированных с учетом изменения веса, без отрицательного влияния на качество жизни. Таким образом, устойчивое ОК влияет на маркеры выживаемости человека и факторы риска заболевания, что позволяют предположить потенциальные выгоды для связанных борьбой со старением результатов [14].
ОК привело к постоянному и значительному снижению от исходного уровня всех измеренных общепринятых кардиометаболических факторов риска, включая изменения уровня холестерина, отношения общего холестерина к холестерину и систолическое (и диастолическое артериальное давление (NCT00427193). Кроме того, ограничение калорий привело к значительному улучшению через 2 года С-реактивного белка, индекса чувствительности к инсулину и показателя метаболического синдрома по сравнению с контролем. Эти результаты указывают на потенциальную возможность существенного преимущества для здоровья сердечно-сосудистой системы от умеренного ОК у здоровых людей молодого и среднего возраста, и обещают значительную долгосрочную пользу для здоровья населения [15].
На 53 (34 – группа ОК и 19 контрольных) взрослых, не страдающих ожирением, проверили гипотезу о том, что затраты энергии и эндокринных медиаторов снижаются при диете с ОК в течение 2 лет (NCT00427193). Приблизительно 15%-ное ОК достигалось в течение 2 лет, что привело к потере веса в среднем на 8,7 кг, тогда как контроль набрал дополнительно 1,8 кг. В группе с ОК затраты энергии, измеренные в течение 24 часов или во время сна, были приблизительно на 80–120 ккал/день ниже, чем ожидалось, исходя из потери веса, что указывает на устойчивую метаболическую адаптацию в течение 2 лет. Эта метаболическая адаптация сопровождалась значительно сниженной активностью щитовидной железы и выработкой активных форм кислорода (F2-изопростан). Результаты этого двухлетнего исследования ОК у здоровых людей, не страдающих ожирением, дают новые доказательства стойкого замедления метаболизма, сопровождаемого снижением окислительного стресса, что поддерживает теории улучшения уровня жизни и снижения окислительного повреждения при старении млекопитающих. Результаты предполагают, что ОК у людей может улучшить продолжительность жизни и замедлить первичное старение. ОК снижает энергозатраты и, в свою очередь, уменьшает выработку активных форм кислорода и повреждение ДНК, липидов и белков, необходимых для нормального функционирования клеток [16].
Клиническое исследование фазы 3 (NCT00955903) по воздействию ОК на изменения в теле, заболеваниях, функции и качестве жизни проведено на пожилых людях (n = 133, 49% мужчины, 70,4 ± 4,8 года) с индексом массы тела 30–40 кг/м2 [17]. Характер диеты определялся с помощью интервью. В качестве маркеров, в крови измеряли антиоксидантную способность высокочувствительного С-реактивного белка, фактор некроза опухолей-α и интерлейкин-6. Данные о питании были получены из среднего значения трех 24-часовых отзывов. В результате, ОК не было достоверно связаны со снижением воспаления или большей антиоксидантной способностью. При анализе 12 компонентов, была обнаружена значительная положительная связь между общей молочной и общей сывороточной антиоксидантной способностью (0,043; 95% Cl, 0,008-0,069). Значимые ассоциации, наблюдаемые в маркерах воспаления, были между общим растительным фактором и фактором некроза опухолей-α (-0,078; 95% Cl, от -0,151 до -0,005), натрием и интерлейкином-6 (0,091; 95% Cl, 0,023-0,158) и оценками для суммы калорий из твердых жиров, алкогольных напитков и добавленных сахаров и интерлейкином-6 (0,139; 95% Cl, 0,027-0,252). В целом, результаты заслуживают дополнительного исследования с другими биомаркерами хронических заболеваний и акцентирования внимание на рационе питания с учетом потенциальной синергии в пищевых комбинациях [17].
Накапливаются данные, свидетельствующие о положительных преимуществах ОК у людей, причем во многих клинических испытаниях было показано снижение веса и улучшение физиологических маркеров после ОК. Наиболее значимые результаты рассмотрены в обзоре, основанном на 112 публикациях [18].
Испытание диетических программ у людей с рассеянным склерозом проведено на 54 добровольцах с избыточным весом или ожирением (NCT02846558). Участники использовали приложение LoseIt! для регистрации всего потребления пищи в течение периода исследования. Данные, собранные из приложения, стали основной мерой соблюдения диетических изменений. Пациенты 6 месяцев продолжали следовать своей обычной диете, но ограничивали прием пищи 8-часовым периодом в течение дня, т.е., применяли схему ОВП, либо получали ОК со снижением на 25% от обычного питания ежедневно или на 75% меньше – дважды в неделю). В первых двух группах ИМТ снизился на 0,83 (1,77) и 1.03 (1,13), соответственно. У групп, питавшихся с ОВП или без какой-либо диеты, ИМТ практически не изменился. Качество сна ухудшилось во всех группах. Пока нет единого мнения относительно рекомендации конкретной диеты для модуляции демиелинизирующих состояний, таких как рассеянный склероз. Необходимо провести клинические испытания для строгой оценки пищевых стратегий для улучшения целостности и восстановления миелина [19]. В настоящее время начинается другое клиническое испытание по применению ОК при рассеянном склерозе (Calorie-MS, NCT04042415).
Эффекты ОВП на полных пожилых людей определили в пилотном исследовании [20]. Десять людей с избыточной массой тела, сидячими пожилыми людьми (65 лет) с риском или с нарушениями подвижности участвовали в этом испытании. Все участники были проинструктированы о голодании в течение приблизительно 16 часов в день в течение всего четырехнедельного эксперимента. Результаты включали изменения массы тела, окружности талии, когнитивных и физических функций, качества жизни, связанного со здоровьем, и неблагоприятных событий. Средняя потеря веса составила 2,6 кг. Были клинически значимые изменения в скорости ходьбы и улучшения качества жизни. Результаты этого пилотного исследования показывают, что ОВП является приемлемым и выполнимым режимом питания для людей с избыточным весом, ведущих сидячий образ жизни.
Что касается ограничения потребления белка, по данным Национальной программы проверки здоровья и питания (США), собранных с помощью опросов, данные свидетельствуют о том, что общий уровень смертности повышен на 75% у лиц в возрасте 50–65 лет, которые потребляют более 20% своей энергии из белка по сравнению с потребляющими менее чем 10%, однако это соотношение сохранялось только тогда, когда белок был из источников животного происхождения [21]. Хотя причинно-следственная связь не может быть установлена, эта работа предполагает, что белок, в частности из животных источников, ускоряет старение у людей. Предполагают, что ограничение белковой пищи снижает уровень IGF-1, и это способствует продлению жизни.
Результаты исследований подтверждают антивозрастное влияние ограничения белков, но была выполнена работа, направленная на установление важности ограничения определенных аминокислот, а не общей массы белка [22]. В исследовании рандомизировали 75 участников с избыточным весом или ожирением на две группы, которым назначили 16 недель вегетарианской диеты с низким содержанием белка и контрольная. Вегетарианской группе было предложено полностью ограничить потребление белков животного происхождения, содержащих аминокислоты с разветвленной цепью, и придерживаться диеты, богатой овощами, зерном, бобовыми и фруктами. Напротив, контрольной группе было дано указание поддерживать привычный режим питания. После эксперимента метаболические показатели в контрольной диете не изменились, однако веганская группа с низким содержанием белка показала снижение массы тела (-6,5 кг), жировой массы (-4,3 кг) и висцеральной жировой ткани (-224 см3), наряду с уменьшением резистентности к инсулину. Более того, корреляционный анализ показал, что большее снижение потребления животного белка и лейцина, в частности, было связано с большей потерей жира, в то время как снижение потребления гистидина было связано с улучшением инсулинорезистентности [22]. Эти результаты предполагают, что уменьшение животного белка и соответствующих аминокислот может иметь решающее значение для улучшения метаболического здоровья и старения, что подтверждает наблюдения, связывающие животный белок с сердечно-сосудистыми заболеваниями, раком и смертностью. Данные пищевых записей также зафиксировали снижение потребления жира на 17,9% в группе с низким содержанием белка по сравнению с контрольной группой [22].
Хотя традиционное ОК значительно улучшает маркеры старения у людей, манипуляции с выбором времени приема пищи, частоты приема пищи и потребления макронутриентов могут привести к дальнейшему улучшению физиологических конечных точек, связанных с первичным и вторичным старением, в то же время улучшая показатели здоровья населения в целом. Исследования на людях до сих пор показали, что дефицит энергии и, следовательно, потеря веса могут быть достигнуты с помощью ИГ, так как люди не могут полностью компенсировать длительные периоды серьезного ограничения питания. Кроме того, независимо от энергетического баланса, улучшения в маркерах старения были показаны при ИГ и ограничении белка. Тем не менее, несоответствие между данными очевидно и возможно из-за разнообразия протоколов и метаболического статуса участников исследования. Существует мало свидетельств, которые сравнивали новые диетические стратегии с традиционным ОК в течение длительных периодов и включали всестороннюю оценку маркеров старения. Также очень важно чтобы проводились сравнительные исследования, прежде чем любая стратегия сможет претендовать на превосходство в замедлении старения у людей.
Материал содержит общую информацию и не может рассматриваться как замена рекомендаций лечащего врача.
1. Тагаева, Т.О., Казанцева, Л., общественное здоровье и реформа здравоохранения в россии. Мир новой экономики, 2019(4): p. 126-134. DOI: 10.26794/2220-6469-2019-13-4-126-134.
2. Weindruch, R., The retardation of aging by caloric restriction: studies in rodents and primates. Toxicologic pathology, 1996. 24(6): p. 742-745. DOI: 10.1177/019262339602400618.
3. Dorling, J.L., Martin, C.K., Redman, L.M., Calorie restriction for enhanced longevity: The role of novel dietary strategies in the present obesogenic environment. Ageing Res Rev, 2020: p. 101038. DOI: 10.1016/j.arr.2020.101038.
4. Mark P. Mattson. https://en.wikipedia.org/wiki/Mark_Mattson ; http://neuroscience.jhu.edu/research/faculty/57/MarkMattson.php
5. Mattson, M.P., ENERGY INTAKE, MEAL FREQUENCY, AND HEALTH: A Neurobiological Perspective. Annual Review of Nutrition, 2005. 25(1): p. 237-260. DOI: 10.1146/annurev.nutr.25.050304.092526.
6. Mattson, M.P., Wan, R., Beneficial effects of intermittent fasting and caloric restriction on the cardiovascular and cerebrovascular systems. The Journal of Nutritional Biochemistry, 2005. 16(3): p. 129-137. DOI: 10.1016/j.jnutbio.2004.12.007.
7. Mattson, M.P., Longo, V.D., Harvie, M., Impact of intermittent fasting on health and disease processes. Ageing Res Rev, 2017. 39: p. 46-58. DOI: 10.1016/j.arr.2016.10.005.
8. Saxton, J.A., Boon, M.C., Furth, J., Observations on the Inhibition of Development of Spontaneous Leukemia in Mice by Underfeeding. Cancer Research, 1944. 4(7): p. 401.
9. Cheney, K.E., Liu, R.K., Smith, G.S., Meredith, P.J., Mickey, M.R., Walford, R.L., The Effect of Dietary Restriction of Varying Duration on Survival, Tumor Patterns, Immune Function, and Body Temperature in B10C3F1 Female Mice1. Journal of Gerontology, 1983. 38(4): p. 420-430. DOI: 10.1093/geronj/38.4.420.
10. Masoro, E.J., Minireview: Food Restriction in Rodents: An Evaluation of Its Role in the Study of Aging. Journal of Gerontology, 1988. 43(3): p. B59-B64. DOI: 10.1093/geronj/43.3.B59.
11. Speakman, J.R., Mitchell, S.E., Caloric restriction. Molecular Aspects of Medicine, 2011. 32(3): p. 159-221. DOI: 10.1016/j.mam.2011.07.001.
12. Pifferi, F., Terrien, J., Marchal, J., Dal-Pan, A., Djelti, F., Hardy, I., Chahory, S., Cordonnier, N., Desquilbet, L., Hurion, M., Zahariev, A., Chery, I., Zizzari, P., Perret, M., Epelbaum, J., Blanc, S., Picq, J.-L., Dhenain, M., Aujard, F., Caloric restriction increases lifespan but affects brain integrity in grey mouse lemur primates. Communications Biology, 2018. 1(1): p. 30. DOI: 10.1038/s42003-018-0024-8.
13. Rochon, J., Bales, C.W., Ravussin, E., Redman, L.M., Holloszy, J.O., Racette, S.B., Roberts, S.B., Das, S.K., Romashkan, S., Galan, K.M., Hadley, E.C., Kraus, W.E., for the, C.S.G., Design and Conduct of the CALERIE Study: Comprehensive Assessment of the Long-term Effects of Reducing Intake of Energy. The Journals of Gerontology: Series A, 2010. 66A(1): p. 97-108. DOI: 10.1093/gerona/glq168.
14. Ravussin, E., Redman, L., Rochon, J., Das, S., Fontana, L., Kraus, W., Romashkan, S., Williamson, D., Meydani, S., Villareal, D., Smith, S., Stein, R., Scott, T., Stewart, T., Saltzman, E., Klein, S., Bhapkar, M., Martin, C., Gilhooly, C., Roberts, S., A 2-Year Randomized Controlled Trial of Human Caloric Restriction: Feasibility and Effects on Predictors of Health Span and Longevity. The journals of gerontology. Series A, Biological sciences and medical sciences, 2015. 70. DOI: 10.1093/gerona/glv057.
15. Kraus, W.E., Bhapkar, M., Huffman, K.M., Pieper, C.F., Krupa Das, S., Redman, L.M., Villareal, D.T., Rochon, J., Roberts, S.B., Ravussin, E., Holloszy, J.O., Fontana, L., 2 years of calorie restriction and cardiometabolic risk (CALERIE): exploratory outcomes of a multicentre, phase 2, randomised controlled trial. The Lancet Diabetes & Endocrinology, 2019. 7(9): p. 673-683. DOI: 10.1016/S2213-8587(19)30151-2.
16. Redman, L.M., Smith, S.R., Burton, J.H., Martin, C.K., Il’yasova, D., Ravussin, E., Metabolic Slowing and Reduced Oxidative Damage with Sustained Caloric Restriction Support the Rate of Living and Oxidative Damage Theories of Aging https://www.sciencedaily.com/releases/2018/03/180322141008.htm. Cell Metabolism, 2018. 27(4): p. 805-815.e804. DOI: 10.1016/j.cmet.2018.02.019.
17. Crowe-White, K.M., Ellis, A.C., Mehta, T., Locher, J.L., Ard, J.D., Dietary Quality Assessed by the HEI-2010 and Biomarkers of Cardiometabolic Disease: An Exploratory Analysis. Journal of the American College of Nutrition, 2019. 38(7): p. 640-647. DOI: 10.1080/07315724.2019.1580168.
18. Most, J., Tosti, V., Redman, L.M., Fontana, L., Calorie restriction in humans: An update. Ageing Res Rev, 2017. 39: p. 36-45. DOI: 10.1016/j.arr.2016.08.005.
19. Langley, M.R., Triplet, E.M., Scarisbrick, I.A., Dietary influence on central nervous system myelin production, injury, and regeneration. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) — Molecular Basis of Disease, 2020. 1866(7): p. 165779. DOI: 10.1016/j.bbadis.2020.165779.
20. Anton, S.D., Lee, S.A., Donahoo, W.T., McLaren, C., Manini, T., Leeuwenburgh, C., Pahor, M.J.N., The effects of time restricted feeding on overweight, older adults: a pilot study. 2019. 11(7): p. 1500.
21. Levine, Morgan E., Suarez, Jorge A., Brandhorst, S., Balasubramanian, P., Cheng, C.-W., Madia, F., Fontana, L., Mirisola, Mario G., Guevara-Aguirre, J., Wan, J., Passarino, G., Kennedy, Brian K., Wei, M., Cohen, P., Crimmins, Eileen M., Longo, Valter D., Low Protein Intake Is Associated with a Major Reduction in IGF-1, Cancer, and Overall Mortality in the 65 and Younger but Not Older Population. Cell Metabolism, 2014. 19(3): p. 407-417. DOI: 10.1016/j.cmet.2014.02.006.
22. Kahleova, H., Fleeman, R., Hlozkova, A., Holubkov, R., Barnard, N.D., A plant-based diet in overweight individuals in a 16-week randomized clinical trial: metabolic benefits of plant protein. Nutrition & Diabetes, 2018. 8(1): p. 58. DOI: 10.1038/s41387-018-0067-4.